简介

蛋白质相互作用在细胞功能的各个方面都至关重要，包括信号转导、代谢和细胞分裂。了解这些相互作用对于理解生物系统如何运作至关重要。酵母双杂交是一种强大的技术，可以用来揭示蛋白质相互作用。它基于酵母细胞的独特生物学特征，使它们能够报告两个蛋白质是否相互作用。

酵母双杂交的原理

酵母双杂交技术依赖于酵母细胞中转录活性的激活。当两个蛋白质相互作用时，它们会将两个转录激活域（或破坏域）组合在一起，从而激活一个报告基因的转录。该报告基因可以产生一个可检测的信号，例如颜色变化或抗生素抗性。

创建酵母双杂交文库

为了进行酵母双杂交实验，首先需要创建一个感兴趣蛋白质的酵母文库。该文库通常使用构建体创建，其中目标蛋白质与酵母激活域或破坏域融合。然后将该文库转化到酵母菌株中，其中表达另一个蛋白质的酵母激活域或破坏域。

测定蛋白质相互作用

一旦构建了酵母文库，就会将其与候选蛋白质一起培养。如果目标蛋白质和候选蛋白质相互作用，它们将组合激活域或破坏域并激活报告基因。然后可以通过筛选报告基因的表达来识别相互作用的蛋白质。

酵母双杂交的优点

酵母双杂交技术具有几个优点：

它是一种强大而敏感的技术，可以检测蛋白质相互作用，即使相互作用很弱或瞬态。

它可以高通量地进行，这使得一次性筛选许多潜在的相互作用成为可能。

它在活细胞中进行，提供蛋白质相互作用的生理背景。

酵母双杂交的限制

尽管有优点，但酵母双杂交技术也有一些限制：

它受到酵母细胞背景和蛋白质可溶性的影响。

它可能会产生假阳性和假阴性结果。

它不能提供蛋白质相互作用的定量信息。

酵母双杂交在研究中的应用

酵母双杂交技术已广泛用于各种研究应用中，包括：

蛋白质-蛋白质相互作用的映射：酵母双杂交可以识别特定蛋白质相互作用的蛋白质互作网络。

蛋白质功能的研究：通过确定相互作用的蛋白质，可以推断出未知蛋白质的功能。

药物开发：酵母双杂交可以用于筛选潜在的药物靶点，其中靶向蛋白质相互作用可以破坏致病机制。

进化研究：酵母双杂交可以用来研究蛋白质相互作用的进化保守性和差异性。

酵母双杂交技术的发展

近年来，酵母双杂交技术不断发展，包括：

改进的筛选方法：新方法可以提高通量和灵敏度。

蛋白质纯化标签：可以对相互作用的蛋白质进行纯化和鉴定。

共免疫沉淀（Co-IP）：酵母双杂交可以与共免疫沉淀相结合，以验证蛋白质相互作用。

酵母双杂交技术是研究蛋白质相互作用的强大工具。它的优点使其成为各种研究应用的宝贵技术。随着技术的不断发展，酵母双杂交在揭示生物系统复杂性的未来研究中将继续发挥至关重要的作用。